【关键词】 完全抗原
摘 要 目的:检测eae中起关键趋化作用的mcp-1的表达，探讨山西医科大学动物室的wistar大鼠诱导实验性变态反应脑脊髓炎动物模型。方法:采用免疫诱导方法制备eae模型并he染色，同时用原位杂交法检测eae大鼠mcp-1的表达。结果:免疫后12d～17d，发病鼠出现eae临床症状，he染色，光镜下可见血管周炎性浸润，mcp-1的表达明显增加。结论:山西医科大学wistar大鼠成功的诱导实验性变态反应脑脊髓模型是可信、可用的。
关键词 完全抗原;wistar大鼠;eae;mcp-1
多发性硬化（multiple sclerosis，ms）是中枢神经系统（centralnervous system，cns）的炎性脱髓鞘疾病，多发于20岁～40岁女性，大多数患者的病程为复发和缓解交替，在复发期常出现视力受损、肢体无力、平衡失调、麻木、感觉异常、口齿不清、眩晕、大小便机能失调等症状。ms病因和发病机制复杂，一般认为与免疫、病毒感染、遗传等因素有关。实验性变态反应性脑脊髓炎（experimentalau-toimmune encephalomyelitis，eae）的病理变化及发病机制与急性ms极其相似，因此，成功的建立eae模型对ms的研究有很重要的意义。本实验的研究可为后期的研究工作提供基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料 wistar大鼠:购自山西医科大学动物实验室。原位杂交试剂盒:购于武汉博士德生物制品公司。
1.2 方法
1.2.1 完全抗原的制备:取液体石蜡40ml，羊毛脂20g混合、加热并融化制得不完全弗氏佐剂（in-complete freund'sadjuvant，ifa），分装入10ml小瓶，高压灭菌后4℃冰箱保存。健康350g～450g左右雌性豚鼠用3%戊巴比妥45mg/kg腹腔注射至四肢瘫软。无菌状态下，剪开胸腔、剥离心包，0.01mol/l pbs左心室灌注直至肝脏变白;迅速取其脑脊髓，小心剥离脑脊膜后称重，加入等量生理盐水，制成50%（w/v）匀浆。同时融化ifa，1ml ifa加入约10mg的m.bovisbcg即制得cfa。将cfa与gpsch等体积混合，用注射器反复抽推，制成油包水乳液，制成完全抗原，放置冰上备用。
1.2.2 模型制备:将健康、雌性wistar大鼠30只，随机分成正常对照组、佐剂组和eae组，三组大鼠左后肢足垫皮下分别注射完全抗原0.4ml/只，百日咳原液0.05ml/只（含5.0×10 9 个菌体）。记免疫当日为零天，每天称重，采用双盲法两人进行临床症状评分，取平均值，临床评分2分为发病动物，临床评分采用通用的五分评分法，即:0分无症状，1分动物尾部肌张力降低，2分动物尾部麻痹+后肢肌张力低，3分尾麻痹+后肢肌张力重度低，4分尾麻痹+四肢麻痹，5分频死状态。发病动物只数/实验动物只数为发病率。免疫后12d～17d，3%戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射，至四肢瘫软，无菌状态下，剪开胸腔剥离心包，0.01mol/l pbs左心室灌注至肝脏变白;4%多聚甲醛灌流至尾部僵直，解剖迅速取其大脑视交叉前后2mm组织、小脑和脑桥部、脊髓颈腰膨大处，再用4%多聚甲醛固定半小时，做常规石蜡包埋、切片。
1.2.2 he染色:按常规方法进行。
1.2.3 ish染色:参照试剂盒中的方法进行。
