摘要：从发生根结线虫病害的丝瓜、柑桔、水蜜桃等作物的根上的根结线虫卵囊上分离获得6株绮丽小克银汉霉(Cunning-hamella elegans Lendner)。接种试验证实这些分离物可寄生南方根结线虫的卵。
关键词：根结线虫；绮丽小克银汉霉；食线虫真菌
中图分类号：S476+.1 文献标识码：A 文章编号：1673-0925(2008)02-0125-03
根结线虫是农作物的重要病原线虫，自然界有许多真菌能寄生于根结线虫的虫体、卵及卵囊上，这些真菌被称为食线虫真菌，对控制根结线虫的危害具有一定作用。因此，开发利用食线虫真菌资源用于作物根结线虫病生物防治研究具有重要的应用价值。本课题组近年来在福建省开展食线虫菌物资源的调查中，从寄生于丝瓜、蜜桔和水蜜桃根部根结线虫的卵囊上获得绮丽小克银汉霉(Cunninghamella elegansLendner)的分离物，并测定了这些分离物对南方根结线虫的致病性。
1 材料与方法
1.1 样品采集
采集带根结的病根样品，记录采集地点、采集时间、土壤质地、寄主种类及作物的生长期，用塑料袋密封并带回实验室及时分离。
1.2 食线虫真菌分离鉴定
从根结线虫组织中剖取变色卵囊，使用体积分数为1.0％的NaClO溶液表面消毒3min，无菌水漂洗3次，无菌吸水纸吸去表面水滴。将卵囊单个移入PSA平板内，25℃条件下进行黑暗培养。待菌丝伸长并形成小菌落后，立即进行转管纯化培养和种类鉴定。
1.3 根结线虫种的鉴定
根结线虫用于分离食线虫真菌之前，进行种类鉴定。通过光学显微镜观察雄虫、幼虫和雌虫整体形态特征，利用扫描电镜观察雌虫会阴花纹和头部细微结构。
1.4 分离物的侵染性测定
剖取新鲜无病的根结线虫卵囊，卵囊表面用体积分数为1.0％NaClO溶液消毒3min，无菌水漂洗3次后用灭菌吸水纸吸去表面水膜，置于WA薄平板上，使用微量取样器滴加绮丽小克银汉霉的孢子悬浮液(106个.mL-1)于卵囊旁。25℃条件下培养10d，挑取卵囊镜检进行侵染性观察，按上述方法对卵囊上的真菌进行重新分离。
2 结果与分析
2.1 绮丽小克银汉霉(C.elegans Lendner)的形态学鉴定
绮丽小克银汉霉在PSA平板上生长迅速，25℃条件下3d即可长满培养皿。菌落略带银白色，背面无色。小孢囊梗从菌丝伸出，直立，分枝，有隔膜(图1A、lB)，顶端形成孢囊，周生细刺(图1D)，其上生有单细胞、球形、卵形或洋梨形的“分生孢子”。孢子梗分枝轮生，有的生长在同一平面(图1C)，在顶端二次轮生(图1A、1B)，主轴顶生的顶囊的直径为22.5—30.0μm；分生孢子球形或椭圆形，表面密生细刺(图1E)，大小为(7.5—10.0)μm×(6.0—7.5)μm，根据参考文献描述，该种类鉴定为绮丽小克银汉霉。
2.2 绮丽小克银汉霉分布
调查的结果表明，绮丽小克银汉霉呈局部地理分布。本课题组从福建省10个县(市)17种作物的根结线虫上分离获得813个分离物，侧顺昌和古田2地的3种作物根结线虫卵囊上即分离到6株绮丽小克银汉霉，占食线虫真菌分离物总数的O.74％。在绮丽小克银汉霉发生地的调查还表明，该菌在食线虫菌物种群中所占的比例很小；在福建顺昌八角丝瓜、蜜桔和古田水蜜桃的根结线虫卵囊上，该菌的分离率分别为2.90％、1.59％和3.33％(表1)，在雌虫上未分离到此菌，由此，可以认为绮丽小克银汉霉仅是根结线虫卵和卵囊的寄生菌。
2.3 绮丽小克银汉霉对南方根结线虫卵的侵染性
回接鉴定发现，绮丽小克银汉霉能寄生于南方根结线虫的卵囊和卵粒上(图2)，并能从接种该菌的卵囊上重新分离出该菌。
3 讨论
鉴定和侵染性试验证实，绮丽小克银汉霉能寄生根结线虫的卵囊和卵，具有开发和利用前景。Galper等用绮丽小克银汉霉防治番茄爪哇根结线虫M.jauanica，当土壤中接种该菌并添加体积分数为0.1％的胶原质时，根结指数下降了70％，达到很好的防治效果。刘维志等曾在大豆胞囊线虫的胞囊中分离到绮丽小克银汉霉，并报道了该种能定殖于大豆胞囊线虫的胞囊。
