【关键词】 注射用神经活素
【摘要】 目的 了解注射用神经活素(nerve growth factor for injection，ngf)对大鼠的致畸胎性和胚胎毒性。方法 体重250～350g的wistar大鼠分成5组，每组雄鼠15只、孕鼠30只，在妊娠d6～d15每天肌肉注射给药1次。ngf设40、200和1000u/kg 3个剂量组，分别相当于人临床拟用剂量的2.4、12和60倍。另设溶剂对照组和7mg/kg环磷酰胺阳性对照组。结果 注射用神经活素1000u/kg组胎鼠身长缩短，呈现一定胚胎毒性作用。40u/kg和200u/kg组及溶剂对照组的活胎率、吸收胎率、死胎率、外观畸形率、骨骼畸形率、内脏畸形率，胎鼠身长、尾长、体重等均在正常范围。环磷酰胺阳性对照组呈现阳性结果，提示所用动物种属对致畸物反应敏感，本次实验结果可靠。结论 未见明显母体毒性、胚胎毒性和致畸胎作用。
【关键词】 注射用神经活素；胚胎毒性；母体毒性；致畸胎作用
teratologic studies of nerve growth factor injection in rats
li hai-yan, wang ai-ping, zhang qing-lin.
chinese academy of medicine sciences and peking union medical college,beijing 100050,china
【abstract】 objective nerve growth factor for injection(ngf),a new drug used for peripheral nerve injury, was evaluated for its effects on reproduction, embryonal and fetal development.methods wistar rats weighting 250～300g were divided into five groups, each consisting of 15 males and 30 females. doses of 0(control),40,200, and 1000u/kg body weight /day were given by muscle injection on days 6～15 of gestation, respectively. fetuses were removed by cesarean section 1 day prior to expected parturition and were examined for external, skeletal, and/or soft tissue abnormalities, etc. a vehicle control was given at a volume equivalent to that administered to the highest drug dosage group and a positive control was given cyclophosphamide at a dose of 7mg/kg body weight.results the occurrence of fetal length shorten in dosage group of 1000u/kg body weight appeared some embryotoxicity of nerve growth factor for injection. there are no major change which observed in dose of 0(control),40 and 200u/kg body weight such as viable fetuses rate , resorption and dead fetuses rate, external , skeletal , visceral abnormality, fetal weight and length, tail.conclusion no evident matermal toxicity, embryotoxicity and teratogenicity resulted from nerve growth factor for injection(ngf).
【key words】 nerve growth factor for injection; embryotoxicity; maternal toxicity; teratogenicity
注射用神经活素(nerve growth factor for injection)是一种治疗多种原因引起的周围神经损伤的新药。为了解该药对大鼠的致畸胎性和胚胎毒性，用wistar种大鼠开展本项研究。
1 材料与方法
1.1 供试品 注射用神经活素(nerve growth factor for injection，ngf)，批号：991013，1000u/支。固体白色粉末，易溶于水，ph6.7。专人保管，防潮。放入4℃冰箱中避光保存。每次取供试品的数量、日期、使用人员、使用目的都登记在案，研究结束后，剩余的供试品送还委托单位。溶剂：注射用水。
1.2 研究系统 wistar大鼠，雌鼠210只;雄鼠75只。鼠龄80～110天, 健康性成熟未经交配生育的大鼠。实验开始时动物体重200～250g左右(♀) ，300～350g左右(♂)。动物来源:军事医学科学院实验动物中心提供。动物合格证号:bdw980125。研究系统选择说明:中华人民共和国“新药审批办法”规定大鼠可以作为致畸胎实验的首选动物［1］；这种动物对各种化学致畸物敏感,实验结果准确可靠；该动物遗传背景清楚；委托单位同意使用这种动物；实验操作简便,容易管理；本实验室积累了多年工作的基础资料与数据。动物到达后,按sopc001a的要求接收。给每只动物确定一个独立的检疫流水号。分组时为每只动物指定一个单一的研究动物号。动物及笼卡上标明动物号。原始资料中使用研究动物号来识别。动物的标记方法参照生殖毒性实验sopt033。妊娠期动物饲养在标准饲养盒内,每盒5只,盒内保持清洁干燥,房间定时通风消毒,自然光照,室温23～25℃,湿度30%～70%。
新领到的动物检疫期1周,在检疫期间观察动物饮水、摄食和健康状况,健康大鼠皮毛光滑、反应灵敏、七孔无分泌物。确认动物健康无病后,用于实验。饲料使用本院动物中心研制的标准膨化块料喂养。饮用水为塑料瓶装自来水，自由饮用。
1.3 实验设计
1.3.1 实验设计的依据
1.3.1.1 委托单位提供的急性毒性资料 无。
1.3.1.2 委托单位提供的药效学资料 无。
1.3.1.3 委托单位提供的药代动力学资料 半衰期3.83 h（iv）。
1.3.1.4 委托单位提供的临床试用方案 拟用临床剂量1000～2000u/次/天；疗程20天；给药途径，肌注。
1.3.1.5 其他 我国国家食品药品监督管理局“药品非临床研究质量管理规范［2］”和“药品注册管理办法［3］”中有关规定。
1.3.2 实验分组 注射用神经活素设1000、200和40u/kg体重3组。同时设注射用水溶剂对照1组，给药途径及容量同注射用神经活素给药组。环磷酰胺7mg/kg为阳性对照组，于妊娠第11～13天肌肉注射。给药容量为0.1ml/100g体重。大鼠肌注注射用神经活素致畸胎实验分组设计见下表1。
表1 大鼠肌注注射用神经活素致畸胎实验分组 略
1.3.3 供试品给予途径和次数 给药途径，肌注；给药体积0.1ml/100g体重；给药时间每天上午8:30～10:30；给药期限妊娠期d6～d15。
1.3.4 给予供试品的途径说明 根据中华人民共和国卫生部药政局《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》［1］,致畸胎试验敏感期毒性实验有关规定和要求。于妊娠期第6天胚胎器官形成期开始给药,每天1次,连续给10天。给药途径与人临床拟用途径相同。给药期间每隔2天称1次体重, 根据体重变化调整给药量。
1.3.5 供试品及对照品的配制 取1000u/支安瓿的ngf 1支，加入1ml注射用水配制成1000u/ml的原液为高剂量组（ⅰ组）用液，然后依次用注射用水1：4稀释原液成200u/ml（ⅱ组）和40u/ml（3组）的中、低剂量组溶液。ⅳ组直接用注射用水，ⅴ组将环磷酰胺配制成终浓度为7mg/ml的使用液。
1.3.6 供试品的给予 用连有5 1/2号针头的注射器抽取药液，将针头刺入大鼠大腿外侧肌肉，将药液注入。
1.3.7 主要检测仪器 光学显微镜；游标卡尺。
1.3.8 观测指标和时间
1.3.8.1 同笼交配与受精鼠的检查 雌雄鼠以1:1同笼交配,于第2天开始检查雌鼠阴道内或垫板上有无阴栓,如果发现阴栓说明已交配,将已交配的雌鼠称重,做好标记,编号并记录交配日期,然后随机分入各实验组与对照组中。发现阴栓之日定为妊娠期第0天(d0),第2天为妊娠期第1天(d1),以此类推。没有交配的动物继续交配。如发现数日未交配者，则将雌动物取走移入其它雄动物笼中继续交配。
1.3.8.2 每组动物数 按照“新药审批办法”和《新药（西药）临床前研究指导原则汇编》中的有关规定，为保证每组不少于16只孕鼠有效数据, 每组需使用已交配雌鼠＞30只。
1.3.8.3 孕鼠处死 大鼠孕期为21天,妊娠第20天时处死孕鼠。孕鼠处死后立即称重,然后切开腹部暴露两侧子宫和内脏器官,发现任何内脏有异常做好记录。
1.3.8.4 切除子宫和分离胎仔 将左右两侧子宫从母体切下,称子宫与胎仔重量、计数总着床数、 黄体数，然后纵向切开子宫,分离出胎仔、记录死胎、活胎和吸收胎,并记录每只活胎和胎盘的重量。
